Фазовые и модуляционные измерения времен затухания флуоресценции

Фазовые и модуляционные измерения времен затухания флуоресценции [c.63]

Принципы фазово-модуляционных измерений иллюстрируются графиками бив на рис. 3.2. Здесь представлена зависимость m и ф от времени затухания флуоресценции п Н частотах модуляции 10 и 30 МГц Ясно видно, что [c.63]

Суипюсть фазовых и, модуляционных измерений времен затухания флуоресценции состоит в следующем. Образец возбуждают светом, интепсип-ность которого модулирована по синусоидальному закону (см. рис. 3.2). [c.86]

Методы измерения фазовых сдвигов и степени демодуляции флуоресценции также были использованы для регистрации зависящих от времени спектральных сдвигов в меченых мембранах [33]. Таких данных значительно меньше, чем результатов, полученных импульсным измерением кинетики затухания, по в основном оба метода согласуются между собой. На рис. 8.21 изображены графические зависимости кажущихся фазовых т и модуляционных т" времен затухания флуоресценции для TNS, растворенного в глицерине и связанного с везикулами диолеил-1.-а-фосфатидилхолина. Было найдено, что на длинноволновом краю спектра испускания тР > т ". Это соответствует появлению члена с отрицательным предэкспоненЦиальным множителем в законе затухания (см. рис. 8.17) и свидетельствует о том, что про- [c.256]

Существуют два широко используемых метода измерений времен затухания флуоресценции импульсный и фазово-модуляциониый (или гармонический). В импульсном методе образец освещают короткими импульсами света и измеряют зависимость интенсивности флуоресценции от времени. [c.61]

Измеренные значения разности фаз и степени модуляции для любого образца можно использовать для расчета времен затухания, согласно уравнениям (3.6) и (3.7). К сожалению, эти уравнения предполагают, что флуоресценция обра 1ца затухает экспоненциально с единственной константой скорости. Если это условие выполняется, т" и представляет собой действительное время затухания. Предположим теперь, что затухание не описывается одной экспонентой. Это утверждение, обычно следует из не-эквивалентности величин и -Л Для гетерогенного образца [ уравнение (3.20, в котором все а > 0]. кажущиеся значения фазовых времен затухания, обычно крроче кажу1дихс, я значений модуляционных времен. Далее, увеличение частоты модуляции приводит к одновременному уменьшению во личин -хР и т . Обратите внимание, что мы говорим об этих измеренных значениях времен затухания, как о "кажущихся . При работе с фазово-модуляционным флуорометром важно не забывать о том, что величины тР и истолковываются как измеренные значения ф и т. [c.91]

Как для импульсных, так и для фазово-модуляционных измерений необходимо точно определять зависимость интенсивности возбуждающего света от времени. Для импульсных измерений это временная зависимость интенсивности вспышки лампы. В фазово-модуляционном методе необходимо установить фазу возбуждающего света и степень ого модуляции. Такие измерения для возбуждающего света обычно прогюдят, исгюльзуя рассеянный свет, поскольку он имеет нулевое время затухания. Чаще всего применяют суспензии гликогена или коллоидный раствор диоксида кремния (лудокса) в воде. Напомним, что временное разрешение зависит от оо вевдаемой площади фотокатода, а также и от некоторых других факторов. Поэтому при измерении флуоресценции и рассеянного света важно поддерживать постоянную геометрию системы. Для этого рассеивающий раствор помещают в кювету и все наблюдения ведут в одних и тех же условиях, однако регистрацию проводят не при длине волны испускания, а при длине волны возбуждения. В зависимости от используемого метода измеряют либо профиль вспышки лампы, либо фазу и степень модуляции возбуждающего света. Из-за влияния геометрии системы на временную характеристику ФЭУ обычно лучше использовать рассеиватели, а не отражатели света. [c.98]

Энциклопедия по машиностроению XXL

Оборудование, материаловедение, механика и ...