Характеристики испускания флуоресценции

Флуоресцентные методы все шире применяются в биохимических, медицинских и химических исследованиях. Причиной этого служат присущая этим методам высокая чувствительность, а также удобный временной диапазон - испускание флуоресценции происходит через - 10- с (10 нс) после поглощения света. За этот промежуток времени может произойти множество различных молекулярных процессов, которые способны повлиять на спектральные характеристики флуоресцирующего соединения. Такое сочетание чувствительности с подходящим временным диапазоном способствует тому, что флуоресцентные методы обычно используют для изучения белков и мембран и их взаимодействий с другими макромолекулами. [c.7]

Важной характеристикой решеточных монохроматоров является зависимость эффективности пропускания от поляризации света, показанная на рис. 2.6 для плоской и вогнутой решеток. Вследствие этого наблюдаемые интенсивности флуоресценции могут зависеть от поляризации испускаемой флуоресценции. Кроме того, спектр испускания образца может быть сдвинут по длинам волн и иметь измененную форму в зависимости от того, при каких условиях поляризации произведена запись. Рассмотрим, например, спектр испускания, записанный с одним и тем же типом решетки, но с помощью поляризатора, ориентированного вертикально (II) и горизонтально [c.37]

ТИ краткое описание характеристик спектральных свойств, наблюдаемых при использовании стационарных методов. Предположим, что существуют такие длины волн, которые соответствуют испусканию только из исходного возбужденного состояния F и только из состояния к, образовавшегося в результате реакции. Вначале будем считать, что реакция необратима, т.е. = О (рис. 12.1). Относительный квантовый выход флуоресценции из состояния F равен отношению излучательной константы скорости к суммарной константе скорости дезактивации состояния Р. Таким образом, [c.392]

В результате спектральные характеристики флуорофоров могут дать большую информацию о динамических процессах, протекающих за время испускания флуоресценции. [c.24]

В основе любого эксперимента лежат измерение некоторой величины и корреляция полученных результатов с явлением, представляющим интерес для исследователя. Временной диапазон между поглощением света и последующим его испусканием достаточен для протекания нескольких процессов, каждый из которых приводит к ослаблению наблюдаемых спектральных характеристик флуоресценции. К таким процессам относятся столкновения с тушителями, вращател11ная и поступательная диффузия, образование комплексов с растворителями или с растворенными веществами и переориентация окружения молекулы в возбужденном состоянии с измененн1)1м диполь- [c.23]

На измерения поляризации флуоресценции сильно влияют поляризационные характеристики монохроматоров. При этом необходимо вносить поправки на изменение эффективности каждой составляющей, выражаемое С-фак-тором (разд. 5.4). Однако и некоторые свойства голографических решеток (рис. 2.6) могут привести к трудностям при измерении поляризации флуоресценции. Предположим, например,, что нужно измерить поляризацию при длине волны испускани.я 450 нм. Эффективность пропускания перпендикулярной компоненты при этой длине волиы крайне мала, что приводит к уменьшению точности измерения. Теперь предположим, что необходимо возбудить флуорофор светом с длиной волны 370 нм. В этом случае подходит вертикально поляризованный свет. Однако измерение С-фактора обычно проводят, используя горизонтально поляризованный свет, а интенсивность этой компоненты низка. [c.40]

Можно обойти эту проблему, используя для измерения П-фактора различные длины волн возбуждения, поскольку С-фактор - это характеристика монохроматора испускания, а не длины волны возбуждения. Эта точка зрения может быть проиллюстрирована следующим примером. При изм1 [)1чши поляризации флуоресценции белка (340 нм) часто используют длину волны возбуждения 300 нм. Бри этой длине волны свет, выходящий из монохроматора возбуждения, почти полностью поляризован в вертикальном направлении, в результате чего интенсивность излучения в горизонтальном направлении недостаточна для измерения С-фактора. Поэтому для измерения нужно использовать несколько различных длин волн возбуждения, обычно 280, 285, 290 и 295 нм, и затем усреднить величину О-фактора. На практике эти величины почти одинаковы, но усреднение повышает точность определения. [c.40]

Как для импульсных, так и для фазово-модуляционных измерений необходимо точно определять зависимость интенсивности возбуждающего света от времени. Для импульсных измерений это временная зависимость интенсивности вспышки лампы. В фазово-модуляционном методе необходимо установить фазу возбуждающего света и степень ого модуляции. Такие измерения для возбуждающего света обычно прогюдят, исгюльзуя рассеянный свет, поскольку он имеет нулевое время затухания. Чаще всего применяют суспензии гликогена или коллоидный раствор диоксида кремния (лудокса) в воде. Напомним, что временное разрешение зависит от оо вевдаемой площади фотокатода, а также и от некоторых других факторов. Поэтому при измерении флуоресценции и рассеянного света важно поддерживать постоянную геометрию системы. Для этого рассеивающий раствор помещают в кювету и все наблюдения ведут в одних и тех же условиях, однако регистрацию проводят не при длине волны испускания, а при длине волны возбуждения. В зависимости от используемого метода измеряют либо профиль вспышки лампы, либо фазу и степень модуляции возбуждающего света. Из-за влияния геометрии системы на временную характеристику ФЭУ обычно лучше использовать рассеиватели, а не отражатели света. [c.98]

Применительно к поляризации флуоресценции наиболее важной характеристикой имлучаемого света является его круговое симметричное pa riptv делетие вдоль оси z. / ля диполя, ориентированного вдоль оси z, следует ожидать одинаковой интенсивности света в направлениях у и х. Интересно отметить, что в направлении оси z нельзя наблюдать этот осциллирующий диполь, так как вдоль этого направления энергия ие излучается. Мы будем говорить о моментах переходов при возбуждении и испускании как о поглощающих и испускающих диполях. [c.127]

Энциклопедия по машиностроению XXL

Оборудование, материаловедение, механика и ...