ПОИСК Статьи Чертежи Таблицы Методы освещения и наблюдения из "Микроскопы, принадлежности к ним и лупы " Структуру препарата, рассматриваемого через микроскоп, можно различить лишь тогда, когда различные частицы препарата отличаются друг от друга и от окружающей их среды по поглощению (отражению) света или по показателю преломления. Эти свойства обусловливают разницу фаз и амплитуд световых колебаний, прошедших через различные участки препарата. От разницы фаз и амплитуд, в свою очередь, зависит контраст изображения. (Здесь под термином разница фаз следует понимать запаздывание или опережение во времени одного луча по отношению к другому разница амплитуд возникает из-за неодинакового поглощения света различными участками препарата и определяет различную интенсивность света, прошедшего через эти участки). Поэтому в зависимости от характера препарата в микроскопии применяются различные методы наблюдения, для осуществления которых служат принципиальные схемы, показанные на фиг. 5—9, где обозначены Об— объектив, АВ — препарат, К—конденсор, аа —выходной зрачок объектива. Да — апертурная диафрагма конденсора, А В — изображение препарата, создаваемое объективом. [c.12] Метод темного поля в отраженном свете (фиг. 8) осуществляется путем освещения препарата, например, шлифа металла или биологической ткани, сверху с помощью специальной кольцевой зеркальной системы, расположенной вокруг объектива и называемой эпиконденсором. Так же как и при проходящем свете, изображение создается только лучами, рассеянными объектом, тогда как лучи света, вышедшие из эпиконденсора и зеркально отразившиеся от поверхности объекта, в объектив не попадают. [c.15] Ввиду того, что при методе темного поля изображение образуется только рассеянными лучами, имеющими слабую интенсивность, для уверенной работы необходимо применять наиболее яркие источники света. [c.15] Метод исследования в поляризованных лучах применяется в проходящем и в отраженном свете для так называемых анизотропных объектов, обладающих двойным лучепреломлением или отражением. Такими объектами являются многие минералы, угли, некоторые животные и растительные ткани и клетки, искусственные и естественные волокна и т. д. Если такие объекты осветить поляризованным светом, то при прохождении через объект происходят характерные видоизменения поляризации света. По этим изменениям можно судить об основных оптических характеристиках анизотропного препарата. К главным оптическим характеристикам относятся сила двойного лучепреломления, количество оптических осей (одноосный, двуосный), ориентировка осей по от-нощению к геометрической форме объекта, способность вращать плоскость поляризации и плеохроизм. Эти характеристики в свою очередь связаны с некоторыми важнейшими свойствами, присущими изучаемому объекту. [c.16] При исследовании анизотропных препаратов к обычной схеме микроскопа добавляют перед конденсором— поляризатор, а после объектива — анализатор, находящиеся в скрещенном либо параллельном положении друг относительно друга. Объект может поворачиваться вокруг оси микроскопа. При скрещенных поляризаторе и анализаторе в темном поле зрения микроскопа видны темные, светлые или окрашенные двоякопреломляющие элементы объекта. Вид этих элементов зависит от положения объекта относительно плоскости поляризации и от величины двойного лучепреломления. Более точное определение оптических данных объекта делается с помощью различных компенсаторов (неподвижных кристаллических пластинок, подвижных клиньев и пластинок и др.). Все измерения при наблюдении в поле непосредственно объекта производятся при очень малой апертуре конденсора. Такое наблюдение называется ортоскопическим. При исследованиях с помощью микроскопа в поляризованном свете проводят также и коноскопическое наблюдение, т. е. наблюдение специфических интерференционных фигур в выходном зрачке объектива, для чего в схему микроскопа вводят дополнительную линзу, проектирующую изображение выходного зрачка в поле зрения окуляра. Эта линза носит название линзы Бертрана. [c.16] В препарате. Метод основан на том, что показатели преломления отдельных участков структуры и окружающей среды различны, вследствие чего световая волна, прошедшая сквозь структуру препарата, претерпевает изменения по фазе и приобретает так называемый фазовый рельеф . Как глаз человека, так и фотографическая пластинка, воспринимают только изменения амплитуды и не чувствительны к изменениям фазы световой волны. Поэтому фазовые изменения световой волны, прошедшей через препарат, с помощью специального оптического устройства преобразуются в изменения амплитуд, что приводит к ослаблению или усилению интенсивности света, прошедшего сквозь объект (т. е. фазовый рельеф волны заменяется амплитудным рельефом ), В результате получается видимое, так называемое фазово-контрастное изображение структуры препарата, в котором распределение яркостей соответствует указанному выше фазовому рельефу. [c.17] Разновидностью метода фазового контраста является так называемый аноптральный контраст, представляющий сочетание фазового контраста с эффектом темного поля. Аноптральный контраст отличается несколько повышенной чувствительностью и пригоден, главным образом, для изучения объектов, дающих малые сдвиги фаз. [c.18] Метод флюоресцентной или люминесцентной микроскопии заключается в следующем. Препарат освещается снизу или сверху сине-фиолетовыми и ближними ультрафиолетовыми лучами. Под действием этого возбуждающего света флюоресцирует, т. е. светится, либо сам препарат (собственная флюоресценция), либо специальные флюоресцирующие красители, которыми препарат предварительно обработан (вторичная флюоресценция). Так как длина волны света флюоресценции всегда больше длины волны возбуждающего света, то их разделяют с помощью светофильтров и изображение препарата изучается только в свете его флюоресценции. [c.18] Метод наблюдения в ультрафиолетовом свете первоначально преследовал цель увеличения разрешающей способности микроскопа. Как уже указывалось выше, разрешающая способность увеличивается с уменьшением длины волны света. Длина волны ультрафиолетовых лучей вдвое меньше длины волны света видимой области. Поэтому ожидалось, что в ультрафиолетовой области спектра разрешающая способность повысится вдвое. Однако этого добиться не удалось из-за трудностей, возникших при изготовлении специальной оптики, прозрачной для ультрафиолетовых лучей. [c.18] Попутно выявилось другое преимущество наблюдения в ультрафиолетовом свете. Обычно живые объекты прозрачны в видимой области спектра и поэтому перед наблюдением их предварительно окрашивают. В то же время нуклеиновые кислоты, белки и другие с оединения имеют избирательное поглощение в ультрафиолетовой области спектра, благодаря чему они могут быть видимы в ультрафиолетовом свете без окрашивания. Кроме того, такое поглощение дает возможность перейти от простых наблюдений к количественным и химическим анализам различных компонентов, имеющихся в тех или иных участках препарата. Это вызвало появление ультрафиолетовых микроскопов-спектрофотометров, с помощью которых можно измерять, например, количество какого-либо вещества в ядре клетки. [c.18] Вернуться к основной статье